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              植物淀粉含量試劑盒說明書
              更新時間:2019-12-09 點擊量:1876

              植物淀粉含量試劑盒說明書

              可見分光光度法

              正式測定前務(wù)必取2-3個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定

              測定意義:

              淀粉是植物中糖的主要儲存形式,其含量測定對于評價食品營養(yǎng)價值和調(diào)查植物體內(nèi)糖代謝都有重要意義。

              測定原理:

              利用 80%乙醇可以把樣品中可溶性糖與淀粉分開,進一步采用酸水解法分解淀粉為葡萄糖,采用蒽酮比色法測定葡萄糖含量,即可計算淀粉含量。

              需自備的儀器和用品:

              可見分光光度計、水浴鍋、可調(diào)式移液器、玻璃比色皿、研缽、冰、濃硫酸(不允許快遞)、

              研缽和蒸餾水。

              試劑的組成和配制:

              試劑一:液體 50mL×1 瓶,4℃保存;

              試劑二:液體 20mL×1 瓶,4℃保存;

              試劑三:粉劑×1 瓶,4℃保存;

              淀粉提取:

              1、 稱取0.1~0.2g 樣本(建議稱取約0.1g樣本)于研缽中研碎,加入1mL試劑一,充分勻漿后轉(zhuǎn)移到EP管中,80℃水浴提取30min,3000g,25℃離心5min,棄上清,留沉淀。

              2、 沉淀中加入0.5mL蒸餾水,放入95℃水浴中糊化15min(蓋緊,以防止水分散失)。

              3、 冷卻后,加入0.35mL 試劑二,25℃提取15min,振蕩3-5次。

              4、 加入0.85mL 蒸餾水,混勻,3000g,25℃離心10min,取上清液待測。

              測定操作表 (在 1.5mL EP 管中依次加入下列試劑) :

              1、 分光光度計預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長至620nm,蒸餾水調(diào)零。

              2、 調(diào)節(jié)水浴鍋至 95 度。

              3、 工作液的配制:臨用前在試劑三中加入7.5mL蒸餾水后,緩慢加入42.5mL濃硫酸,不斷攪拌,充分溶解,待用;用不完的試劑 4℃保存一周;

              4、 樣本測定:取0.2mL樣本和1mL工作液至EP管中,95度水浴10 min(蓋緊,防止水分散

              失),自然冷卻至室溫,在620 nm 波長下記錄測定吸光度值A(chǔ)。

               

               

               

               

               

              淀粉含量計算:

              標準條件下測定的回歸方程為 y=5.872x-0.0295;

              x 為標準品濃度(mg/mL),y 為吸光值。

              1、按照蛋白濃度計算

              淀粉含量(mg/mg prot)=[(A+0.0295)×V1]÷5.872 ÷(V1×Cpr)=0.17×(A+0.0295) ÷Cpr

              2、按樣本鮮重計算

              淀粉含量(mg/g 鮮重)= [(A+0.0295)×V1]÷(W×V1÷V2) =0.289×(A+0.0295) ÷W

              V1:加入反應(yīng)體系中樣本體積,0.2mL;V2:加入提取液體積,1.7 mL;Cpr:樣本蛋白質(zhì)

              濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g

              注意 :由于工作液具有強腐蝕性,請謹慎操作。

              若吸光值大于1,請將樣本用提取液稀釋后再測定,計算公式中乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。

              提取液的配置:0.35mL 試劑二+1.35mL 水。用多少按照此比例配多少。

              低檢測限為10μg/g  鮮重或100ng/mgprot 。

              A549-DDP細胞培養(yǎng)說明書

              滬公網(wǎng)安備 31011802001677號

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