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              大鼠腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞(C6)
              更新時(shí)間:2020-06-12 點(diǎn)擊量:1924

                             大鼠腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞(C6)

               

              細(xì)胞介紹

              膠質(zhì)細(xì)胞株C6是由Benda等用N-nitrosomethylurea誘導(dǎo)的大鼠膠質(zhì)瘤克隆,并經(jīng)過一系列的體外培養(yǎng)和動(dòng)物傳代交替后建成的。當(dāng)細(xì)胞從低密度生長(zhǎng)到滿瓶時(shí),S-100產(chǎn)量增加10倍

               

              細(xì)胞特性

              1) 來源:大鼠,膠質(zhì)瘤

              2) 形態(tài)成纖維細(xì)胞,貼壁生長(zhǎng)

              3) 含量:>1x106

              4) 污染:支原體、細(xì)菌、酵母和真菌檢測(cè)為陰性

              5) 規(guī)格:T25瓶或者1mL凍存管包裝

               

              運(yùn)輸和保存:可選擇干冰運(yùn)輸及發(fā)送復(fù)蘇存活細(xì)胞方式:1干冰運(yùn)輸,收到后立即轉(zhuǎn)入液氮凍存或直接復(fù)蘇;2存活細(xì)胞收到后應(yīng)繼續(xù)生長(zhǎng)傳代達(dá)到細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),再進(jìn)行凍存。具體操作見細(xì)胞培養(yǎng)步驟。

               

              細(xì)胞用途:僅供科研使用。

               

              細(xì)胞接收后的處理:

              1) 收到細(xì)胞后,請(qǐng)檢查發(fā)貨培養(yǎng)瓶的狀況,若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)胞有污染,請(qǐng)拍照后及時(shí)聯(lián)系我們。

              2) 在顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)時(shí),hao在低倍鏡(4或5X物鏡)下進(jìn)行,能準(zhǔn)確判斷細(xì)胞的傳代密度。看細(xì)胞的形態(tài)請(qǐng)?jiān)?0X和20×物鏡下,同時(shí)給剛收到的細(xì)胞拍照(10×,20×)各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存,作為細(xì)胞需要售后時(shí)提供收到細(xì)胞時(shí)細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)。

              3) 觀察好細(xì)胞狀態(tài)后,75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h。

              4) 貼壁細(xì)胞:在運(yùn)輸過程中貼壁細(xì)胞會(huì)有脫落的現(xiàn)象,如發(fā)現(xiàn)貼壁細(xì)胞有脫落或者脫落后抱團(tuán)生長(zhǎng),可將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h,然后抽出瓶中的培養(yǎng)基和未貼壁細(xì)胞1000rpm離心5分鐘,棄去上清重懸后接種到加有按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基的原培養(yǎng)瓶中(或新的培養(yǎng)瓶中)。

              5) 懸浮細(xì)胞:T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h,然后抽出瓶中的培養(yǎng)基和細(xì)胞1000rpm離心5分鐘,棄去上清重懸后接種到新的培養(yǎng)瓶中(加入按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基)。

              6)備注:運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞,請(qǐng)換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。  收到細(xì)胞后第yi次傳代建議1:2傳代 。

               

                                     

              細(xì)胞培養(yǎng)步驟

              一.培養(yǎng)基培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:

              1) 準(zhǔn)備F12K(推薦iCell-0007培養(yǎng)基;馬血清,15%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,2.5%;雙抗,1%注:?jiǎn)我谎迮囵B(yǎng)細(xì)胞的不能保證細(xì)胞狀態(tài)。

              2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

              3) 凍存液90%血清,10%DMSO現(xiàn)用現(xiàn)

              二. 細(xì)胞處理

              1) 復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或將細(xì)胞懸液加入10cm皿中加入8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

              2) 細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%可進(jìn)行傳代培養(yǎng)

              對(duì)于貼壁細(xì)胞,傳代可參考以下方法:

              1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2

              2. 加2ml消化液0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺(tái),輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化

              3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。

              4. 收到細(xì)胞后*傳代推薦將細(xì)胞懸液按1:2的比例分到新的6ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中建議凍存一支備用,后續(xù)傳代根據(jù)實(shí)際情況按1:2到1:5的比例進(jìn)行。

              3)細(xì)胞凍存:細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí),棄去培養(yǎng)基后加入少量胰酶,細(xì)胞變圓脫落后,加入約1ml血清的培養(yǎng)基后加入凍存管中,再添加10%DMSO進(jìn)行凍存

              下面T25瓶為類;

                    1,細(xì)胞凍存時(shí),棄去培養(yǎng)基后,PBS清洗一遍后加入1ml胰酶,細(xì)胞變圓脫落后,加入1ml血清的培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。

                    2,4min 1000rpm 離心去掉上清。加1ml血清重懸細(xì)胞,根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入血清和DMSO,輕輕混勻,DMSO終濃度為10%,細(xì)胞密度不低于1x10E6/ml,每支凍存管凍存1ml細(xì)胞懸液,注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。

                    3,將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80度冰箱,至少2個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

               

               

              注意事項(xiàng):

              1. 收到細(xì)胞后,若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染,請(qǐng)立即與我們聯(lián)系

              2. 所有動(dòng)物細(xì)胞均視為潛在的生物危害性必須在二級(jí)生物安全臺(tái)內(nèi)操作,并請(qǐng)注意防護(hù),所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

              CCK8實(shí)驗(yàn)代做報(bào)價(jià)

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