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              Tricine-SDS-PAGE凝膠制備試劑盒說明書
              更新時間:2020-06-19 點擊量:2212

              Tricine-SDS-PAGE凝膠制備試劑盒說明書

               

              Tricine-SDS-PAGE Gel Kit

              Tricine-SDS-PAGE凝膠制備試劑盒

               

              目錄號:K2384

               

               

              組分說明及保存條件

               

                              Cat. No.          YJ2384

                                                              保存條件

                              Size             約 50塊膠

                              49.5%T 3%C         30 ml         2-8ºC

                              49.5%T 6%C         100 ml        2-8ºC

                              凝膠緩沖液              140 ml        2-8ºC

                              甘油                 30 ml          室溫

                              APS                 0.5 g         室溫

                              TEMED              750 ul      室溫,避光

               

                       本產品所提供的 APS(過硫酸銨)為固體粉末,使用前加入雙蒸水溶

                       解即配制成10%APS溶液(0.5 g  APS加5 ml雙蒸水),將溶液分裝后

                       置于-20℃保存,通常半年內有效。溶液在使用中可放置4℃保存兩周。

               

               

                           本產品僅供科研使用,請勿用于臨床診斷及其他用途  

               

               

              產品簡介

               

                常規(guī)的Tris-SDS-PAGE電泳的只能分辨大分子蛋白,對于相對分子量小的,尤其

              是10 kD以下的蛋白分辨率極低。而Tricine-SDS-PAGE可以很好的分離分子量在1-10 kD

              的蛋白及多肽,成為目前電泳法變性分離多肽的主要方法。本產品包括Tricine-SDS-

              PAGE凝膠制備所需全套試劑,只需自備蒸餾水,即可制備高質量各種濃度的凝膠,方

              便、快捷,電泳后可直接用于考染、銀染、Western雜交等實驗。

               

              注意事項

               

              1.  10%APS配制后分裝-20度保存。APS溶液不穩(wěn)定,應盡量減少室溫存放時間,每

                 次取用后立即放回冰箱,以防失效;若發(fā)現凝膠聚合時間延長,應考慮更換,使用

                 -20度保存的10%APS。

              2.在凝膠配制過程中,尤其是液體混勻步驟,應盡量避免氣泡的產生。

              3.在分離膠上層加蒸餾水時要小心操作,加水時速度不能太快。

              4.丙烯酰胺具有神經毒性,操作時請穿著實驗服并佩戴一次性手套。

              5.本產品僅用于科研,不能用于人體實驗或人體治療。

               

              操作步驟

               

              根據目的蛋白分子量大小選擇合適的PAGE分離膠配制濃度,凝膠濃度配方參考附表。

               I 配制分離膠

              1.將不同體積的雙蒸水、49.5%T 6%C、凝膠緩沖液和甘油加入到離心管中混合。

              2.加入10%APS和TEMED,立即渦旋混勻5-10秒,以使溶液充分混勻。

              3.在凝膠模具中迅速灌入適量分離膠溶液(1 mm mini-gel,分離膠溶液加約4 ml),

                 然后在分離膠溶液上輕輕覆蓋一層1-3  cm的水層,使凝膠表面保持平整。

              4.靜置,待分離膠和水層之間出現一個清晰的界面表示凝膠已聚合。

               

               II 配制夾層膠

                去除覆蓋在分離膠上的水層,用濾紙將殘留的水盡量吸去。

              1.將不同體積的雙蒸水、49.5%T 3%C和凝膠緩沖液加入到離心管中混合。

              2.加入10%過硫酸銨和TEMED,立即渦旋混勻5-10秒,以使溶液充分混勻。

              3.將適量的夾層膠溶液迅速加至分離膠的上面(對于1 mm的mini-gel,夾層膠溶液加

                 約1 ml ),然后在夾層膠溶液上輕輕覆蓋一層水層,使凝膠表面保持平整。

              4.靜置,待夾層膠和水層之間出現一個清晰的界面表示凝膠已聚合。

               

                   III 配制濃縮膠

                     去除覆蓋在夾層膠上的水層,用濾紙將殘留的水吸去。

                  1.將不同體積的雙蒸水、49.5%T 3%C和凝膠緩沖液加入到離心管中混合。

                  2.加入10%過硫酸銨和TEMED,立即渦旋混勻5-10秒,以使溶液充分混勻。

                  3.將梳子插入凝膠內,避免產生氣泡。

                  4.待凝膠聚合后,小心地拔出梳子,以免破壞加樣孔。

                  5.進行電泳操作。

               

                   IV 電泳

                    將電泳槽放入4℃或冰水浴中,外槽加入陽極緩沖液(YJ2388),內槽加入陰極緩

                  沖液(YJ2387),30V預電泳10 min,將樣品(已經過Tricine上樣緩沖液YJ2385

                  處理)加入點樣孔后30V電泳1小時,100V電泳至溴酚藍到達膠底部后停止電泳,進行后續(xù)的考馬斯亮藍染色或電轉。

               

              實驗代做服務:

              ELISA試劑盒免費代檢測

              CCK8檢測

              基因組DNA提取

               

              蛋白相互作用分析

              Western Blot

              免疫組化

              熒光定量PCR

              動物模型服務

              流式細胞檢測

              ROS氧化分析

              激光共聚焦

              DNA甲基化實驗

              細胞劃痕

              鈣離子濃度檢測

              掃描電鏡實驗

              microRNA測序

              動物實驗

              探針合成

              ATP/ADP檢測

              石蠟/冰凍切片

              定點突變

              線粒體膜電位(MMP)檢測

              細胞生長曲線的測定

              藥理毒理動物實驗

               

              免疫共沉淀

              真核表達載體構建

              染色質免疫沉淀CHIP

              非標定量(Label-free)實驗

              滬公網安備 31011802001677號

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