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              林可霉素快速檢測試劑盒說明書
              更新時間:2020-11-13 點(diǎn)擊量:2832

              林可霉素

              快速檢測試劑盒說明書

              一、原理

                  試劑盒采用間接競爭ELISA方法,在微孔條上預(yù)包被偶聯(lián)抗原,樣本中的殘留物林可霉素藥物和微孔條上預(yù)包被的偶聯(lián)抗原競爭抗林可霉素藥物抗體,加入酶標(biāo)記物后,用TMB底物顯色,樣本吸光值與其所含殘留林可霉素藥物的含量成負(fù)相關(guān),與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較即可得出相應(yīng)殘留物林可霉素藥物的含量。

              二、試劑盒特性

              • 試劑盒靈敏度:      0.1ppb
              • 孵育溫度:          25℃
              • 孵育時間:          30min~15min
              • 樣本檢測下限

              組   織  ······································   0.4ppb

              飼   料  ·······································   1ppb

              蜂   蜜  ······································    2ppb

              • 交叉反應(yīng)率

              林可霉素   ····································   100%

              • 樣本回收率

              組   織  ······································  100±25%

              飼   料  ·······································  95±25%

              蜂   蜜  ······································  100±25%

              三、試劑盒組成

              1

              微量測試孔

              每條8孔,一板12條

              2

              標(biāo)準(zhǔn)液×6瓶

              (1ml/瓶)

              0ppb

              0.1ppb

              0.3ppb

              0.9ppb

              2.7ppb

              8.1ppb

              3

              酶標(biāo)記物

              7ml

              紅色帽

              4

              抗體工作液

              7ml

              藍(lán)色帽

              5

              底物A液

              7ml

              白色帽

              6

              底物B液

              7ml

              黑色帽

              7

              終止液

              7ml

              黃色帽

              8

              20X濃縮洗滌液

              40ml

              白色帽

              9

              20X濃縮提取

              50ml

              透明帽

              四、所用儀器、試劑

              具備的儀器微孔酶標(biāo)儀、打印機(jī)、均質(zhì)器 振蕩器、離心機(jī)、刻度移液管、天平(感量0.01g)

              微量移液器:單道 20~200ul、單道100~1000ul、多道 250ul 

              五、樣本前處理步驟

              • 樣本處理前須知

              處理任何樣本時,都必須注意:

              •  本試劑盒所檢測的組織樣本包括:動物組織、禽類和水產(chǎn)組織。eg:雞、鴨、豬、牛、兔、魚、蝦等。
              •  實(shí)驗(yàn)中必須使用一次性吸頭,在吸取不同的試劑時要更換吸頭。
              •  實(shí)驗(yàn)之前須檢查各種實(shí)驗(yàn)器具是否干凈,必要時可對實(shí)驗(yàn)器具進(jìn)行清潔,以避免污染干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
              • 樣本前處理需配制:

              配液1  樣本提取液:  

                     將去離子水與20X濃縮提取液19:1稀釋

              • 樣本前處理方法

              (a)組織樣本(雞肉/肝、豬肉/肝、蝦、魚等)

              1、稱2.0±0.05g 均質(zhì)的組織樣本于50ml離心管中;

              2、加入6ml樣本提取液,振蕩2min4000r/min以上,15℃離心10min

              3、取層50µl液體用于分析。

                 樣本稀釋倍數(shù):4

              (b)飼料樣本

              1、稱1.0±0.05g 粉碎飼料樣本于50ml離心管中;

              2、加入5ml樣本提取液,振蕩1min4000r/min以上,15℃離心10min

              3、取200µl液體加入200µl樣本提取液,震蕩混勻,取50µl用于分析。

                  樣本稀釋倍數(shù):10

              (c)蜂蜜樣本

              1、稱1.0±0.05g 蜂蜜樣本于50ml離心管中;

              2、加入5ml樣本提取液,振蕩1min,4000r/min以上,15℃離心10min

              3、取200µl液體加入600µl樣本提取液,震蕩混勻,取50µl用于分析。

                  樣本稀釋倍數(shù):20

              六、 酶標(biāo)免疫分析程序:

              • 測定前應(yīng)須知:
              • 使用前將需用試劑和板條的溫度回升至室溫(20-25℃)
              • 使用之后立即將所有試劑放回2-8℃
              • 在ELISA分析中的再現(xiàn)性,很大程度上取決于洗板的一致性,正確的洗板操作是ELISA測定程序中的要點(diǎn)。
              • 所有恒溫孵育過程,避免光線照射,用蓋板膜蓋住微孔板。
              • 操作步驟:
              • 將試劑盒從冷藏環(huán)境中取出并將所需試劑從試劑盒取出,置室溫(20-25℃)平衡30min以上, 注意每種液體試劑使用前均須搖勻
              • 按需要取出微孔條及板架,將不用的微孔板重新密封,保存于2-8℃,不要冷凍
              • 配液:將40ml濃縮洗滌液(20倍濃縮)用去離子水按照1:19稀釋(1份濃縮洗滌液+19份去離子水),或按所需用量配制洗滌液。
              • 編號:將樣本和標(biāo)準(zhǔn)品對應(yīng)微孔按序編號,每個樣本和標(biāo)準(zhǔn)品均需做2孔平行,并記錄標(biāo)準(zhǔn)孔樣本孔所在的位置。
              • 加標(biāo)準(zhǔn)品/樣本50µl /孔,然后加酶標(biāo)記物50μl/孔,再加入抗體工作液50µl/孔。輕輕振蕩混勻,用蓋板膜蓋板,25℃環(huán)境反應(yīng)30min
              • 取出并甩干孔內(nèi)液體;用洗滌液按每孔250μl洗板4-5次,每次浸泡15-30秒,拍干(拍干后未被清除的氣泡可用干凈的槍頭刺破)。
              • 顯色:每孔加入底物液A液50µl再加B液50µl,輕輕振蕩混勻,25℃環(huán)境避光顯色15min
              • 測定:加入終止液50µl,輕輕振蕩混勻,設(shè)定酶標(biāo)儀于450nm處(建議用雙波長450/630nm檢測,在5min內(nèi)讀完數(shù)據(jù)),測定吸光度值(OD值)。

              七、結(jié)果判定

              結(jié)果判定有兩種方法,粗略判定可用第1種方法,定量判定用第2種方法。注意樣本吸光度值與其所含林可霉素藥物量成負(fù)相關(guān)。

              1、粗略判定:

                  用樣本的平均吸光度值與標(biāo)準(zhǔn)品比較即可得出其濃度范圍(ng/ml)。假設(shè)樣本1的吸光度值為0.238, 樣本2的吸光度值為0.946,標(biāo)準(zhǔn)液吸光度值分別是:0ppb1.8450.1ppb1.542;0.3ppb1.130; 0.9ppb0.635;2.7ppb0.3268.1ppb0.156。則樣本1的濃度范圍是2.7ppb - 8.1ppb;樣本2的濃度范圍是0.3ppb - 0.9ppb。乘以其對應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中林可霉素藥物的實(shí)際濃度。

              2、定量分析

              (1)百分吸光率的計算,標(biāo)準(zhǔn)品或樣本的百分吸光率等于標(biāo)準(zhǔn)品或樣本的吸光度值的平均值(雙孔)除以第--個標(biāo)準(zhǔn)(0標(biāo)準(zhǔn))的吸光度值,再乘以100%,即

              百分吸光%)=

              B

              ×100%

              B0

              B—標(biāo)準(zhǔn)溶液或樣本溶液的平均吸光度值

              B0—0ng/L標(biāo)準(zhǔn)溶液的平均吸光度值

              (2)標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制與計算

                  以標(biāo)準(zhǔn)品百分吸光率為縱坐標(biāo),以林可霉素標(biāo)準(zhǔn)品濃度(ng/ml)的半對數(shù)為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標(biāo)準(zhǔn)曲線中,從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出樣本所對應(yīng)的濃度,乘以其對應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中林可霉素藥物實(shí)際濃度。

              若利用試劑盒專業(yè)分析軟件進(jìn)行計算,更便于大量樣本的準(zhǔn)確、快速分析。

              八、 注意事項(xiàng)

              • 室溫低于25℃或試劑及標(biāo)本未回到室溫(20-25℃)會導(dǎo)致所有標(biāo)準(zhǔn)的OD值偏低。
              • 在洗板過程中如果出現(xiàn)板孔干燥的情況,則會伴隨著標(biāo)準(zhǔn)曲線不成線性,重復(fù)性不好的現(xiàn)象。所以洗板拍干后應(yīng)立即進(jìn)行下一步操作。
              • 混合要均勻,否則會出現(xiàn)重復(fù)性不好的現(xiàn)象。
              • 反應(yīng)終止液為2M硫酸,避免接觸皮膚。
              • 不要使用過了有效日期的試劑盒;稀釋或攙雜使用會引起靈敏度、OD值變化;不要交換使用不同批號的盒中試劑。
              • 不用的微孔板放進(jìn)自封袋重新密封;標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和無色的發(fā)色劑對光敏感,因此要避免直接暴露在光線下。
              • 顯色液若有任何顏色表明變質(zhì),應(yīng)當(dāng)棄之。標(biāo)準(zhǔn)品1的吸光度值小于0.5時,表示試劑可能變質(zhì)。
              • 若樣本處理方法中檢測濃度不在曲線范圍內(nèi)時,可將樣本稀釋一定倍數(shù),使其可檢測范圍在曲線范圍內(nèi)時檢測。
              • 該試劑盒J反應(yīng)溫度為25℃,溫度過高或過低將導(dǎo)致檢測吸光度值和靈敏度發(fā)生變化。

              九、儲藏條件和保質(zhì)期

              • 儲藏條件:試劑盒于2-8℃保存,不要冷凍。
              • 保 質(zhì) 期:該產(chǎn)品有效期為1年,生產(chǎn)日期見包裝盒。

              提示:酶標(biāo)板真空包裝袋若有漏氣,酶標(biāo)板仍然正常有效,不影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果,請放心使用。

               

               

              動物疾病類檢測產(chǎn)品

              食品安全檢測試劑

              滬公網(wǎng)安備 31011802001677號

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