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              產(chǎn)品目錄
              牛炭疽(Anthrax)ELISA檢測試劑盒使用說明書
              更新時間:2021-06-29 點擊量:1607

              本試劑盒只能用于科學研究,不得用于醫(yī)學診斷

              牛(Bovine)炭疽(Anthrax)ELISA檢測試劑盒使用說明書

              檢測原理

              試劑盒采用雙抗一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)。往預先包被炭疽抗原的包被微孔中,依次加入標本、HRP標記的檢測抗體,經(jīng)過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD 值),與CUTOFF值相比較,從而判定標本中炭疽(Anthrax)的存在與否。

              樣品收集、處理及保存方法

              1.  血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過程中避免任何細胞刺激,收集血液后,3000轉(zhuǎn)離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。

              2.  血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉(zhuǎn)離心30分鐘取上清。

              3.  細胞上清液:3000轉(zhuǎn)離心10分鐘去除顆粒和聚合物。

              4.  組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000轉(zhuǎn)離心10分鐘取上清。

              5.  保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

              自備物品

              1. 酶標儀(450nm)

              2. 高精度加樣器及槍頭:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

              3. 37℃恒溫箱

              操作注意事項

              1.  試劑盒保存在2-8℃,使用前室溫平衡20分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結(jié)晶,這屬于正常現(xiàn)象,水浴加熱使結(jié)晶*溶解后再使用。

              2.  實驗中不用的板條應(yīng)立即放回自封袋中,密封(低溫干燥)保存。

              3.  預處理后的樣本無需稀釋,直接取50μL加樣即可。

              4.  嚴格按照說明書中標明的時間、加液量及順序進行溫育操作。

              5.  所有液體組分使用前充分搖勻。

              試劑盒組成

              名稱

              96孔配置

              48孔配置

              備注

              微孔酶標板

              12孔×8條

              12孔×4條

              陰性對照

              0.5mL

              0.5mL

              陽性對照

              0.5mL

              0.5mL

              檢測抗原-HRP

              10mL

              5mL

              20×洗滌緩沖液

              25mL

              15mL

              按說明書進行稀釋

              底物A

              6mL

              3mL

              底物B

              6mL

              3mL

              終止液

              6mL

              3mL

              封板膜

              2張

              2張

              說明書

              1份

              1份

              自封袋

              1個

              1個

               

              試劑的準備

               20×洗滌緩沖液的稀釋:蒸餾水按1:20稀釋,即1份的20×洗滌緩沖液加19份的蒸餾水。

              洗板方法

              1.  手工洗板:甩盡孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,靜置1min后甩盡孔內(nèi)液體,在吸水紙上拍干,如此洗板5次。

              2.  自動洗板機:每孔注入洗液350μL,浸泡1min,洗板5次。

              操作步驟

              1.  從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。

              2.  設(shè)置陰、陽性對照孔和樣本孔,陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照各50μL;

              3.  待測樣本孔加待測樣本50μL;

              4.  隨后陰、陽性對照孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標記的檢測抗原100μL,用封板膜封住反應(yīng)孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

              5.  棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液,靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復洗板5次(也可用洗板機洗板)。

              6.  每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。

              7.  每孔加入終止液50μL,15min內(nèi),在450nm波長處測定各孔的OD值。

              結(jié)果判斷

               1.  試驗有效性:陽性對照孔OD值平均值≥1.00;

                              陰性對照孔OD值平均值≤0.15。

              2.  臨界值(Cut off)計算:臨界值=陰性對照孔平均值+0.15

              3.  陰性判斷:樣品OD值<臨界值(Cut off),樣品為陰性

              4.  陽性判斷:樣品OD值>臨界值(Cut off),樣品為陽性

              試劑盒性能

              1.  準確性:陽性對照孔OD值平均值≥1.00;陰性對照孔OD值平均值≤0.15,說明試驗結(jié)果有效。

              2.  特異性:不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。

              3.  重復性:板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于15%。

              4.  貯藏:2-8℃,避光防潮保存。

              5.  有效期:6個月

               

              實驗代做服務(wù):

              ELISA試劑盒免費代檢測

              CCK8檢測

              HE染色

              蛋白相互作用分析

              Western Blot

              免疫組化IHC染色

              熒光定量PCR

              動物模型服務(wù)

              流式細胞檢測

              免疫熒光染色

              激光共聚焦

              DNA甲基化實驗

              石蠟/冰凍切片

              透射電鏡服務(wù)

              掃描電鏡實驗

              蛋白雙向(2-D)

              動物實驗

              免疫共沉淀

              原位雜交(FIsh

              蛋白質(zhì)純化

              分子克隆和質(zhì)粒載體構(gòu)建服務(wù)

              組蛋白甲基化磷酸化乙酰化

               

              蛋白雙向2D-WB

               

              藥理毒理動物實驗

               

              番紅O固綠染色

              明膠酶譜MMP

              酶活性檢測

              動物造模/模型實驗服務(wù)

              滬公網(wǎng)安備 31011802001677號

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