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夾心法測(cè)抗原

在夾心ELISA法中可用棋盤滴定法同時(shí)選擇包被抗體和酶標(biāo)抗體的工作濃度， 1：抗體免疫球蛋白用包被緩沖液稀釋至蛋白濃度為10UG/ML”0.1UG/ML,FB分別在ELISABAN板上進(jìn)行包被，每一濃度包被三個(gè)縱行，洗。

2在一個(gè)橫行各包被孔中加入強(qiáng)陽(yáng)性抗原液，另一橫行加入弱陽(yáng)性抗原液，第三橫行加入陰性對(duì)照液，腐育，洗條。

3將酶標(biāo)抗體用稀釋液稀釋成三個(gè)濃度

分別加入每一包被濃度的一個(gè)縱行中，孵育，洗滌。

4加底物顯色，加酸終止反應(yīng)后，讀取A值。

5以強(qiáng)陽(yáng)性抗原液的A值在0.8左右，陰性參考液的A值小于0.1的條件作為zui適條件，據(jù)此選擇包被抗體和酶標(biāo)抗體的工作濃度。包被緩沖液的PH和離子強(qiáng)度對(duì)吸附也有影響。包被蛋白質(zhì)的緩沖溶液的PH宜片5堿性，在PH=7~10都可以達(dá)到較好的吸附效果，如常用的緩沖溶液有碳酸鹽緩沖溶液（PH=9.6）·                          

 緩沖液還影響某些方法的敏感性，在用類脂和病毒抗原包被時(shí)，有必要加入脫氧膽酸鈉，將包被的抗體F 段部分變性可以增加敏感性。

有些單克隆抗體很難吸附固相，需要試用不同的緩沖液及緩沖液的濃度與PH，另外，還要注意包被的條件和包被抗原與抗體的濃度。

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