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              AML12小鼠肝細胞傳代/復(fù)蘇技巧
              更新時間:2024-06-10 點擊量:343

              AML12小鼠肝細胞

              Mouse liver cells ,AML-12

              貨號:YJ-m003(種屬鑒定)

              價格: 2500.0

              規(guī)格: 1*106

              細胞介紹

              AML12α小鼠肝臟12)細胞系由來自針對人TGFα的轉(zhuǎn)基因小鼠(CD1菌株,品系MT42)的肝細胞建立。通過電子顯微鏡觀察,這些細胞表現(xiàn)出典型的肝細胞特征,例如過氧化物酶體和膽小管樣結(jié)構(gòu)。AML12細胞保留表達血清(白蛋白,α1抗胰蛋白酶和轉(zhuǎn)鐵蛋白)和間隙連接(連接蛋白2632)蛋白的高水平mRNA的能力,并且僅含有乳酸脫氫酶的同工酶5。細胞表達高水平的人TGFα和較低水平的小鼠TGFα

              肝臟特異性蛋白質(zhì)的表達在培養(yǎng)中隨時間降低,但通過在無血清培養(yǎng)基中培養(yǎng)細胞而重新激活。。

              細胞特性

              1 來源:小鼠,肝

              2 形態(tài):上皮樣細胞 貼壁生長

              3 含量:>1x10 細胞數(shù)

              4 規(guī)格:T25瓶或者1mL凍存管包裝

              5 用途:僅供科研使用。

              對于貼壁細胞傳代可以參考以下方法:

              1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

              2. 加入0.25%(w / v)胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中(T251-2mLT752-3mL),置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘(難消化的細胞可以適當延長消化時間),然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml10%FBS的培養(yǎng)基來終止消化。 

              3.輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細胞懸液按12的比例分到新T25瓶中,添加6-8ml按照說明書要求配置的新的完全培養(yǎng)基以保持細胞的生長活力,后續(xù)傳代根據(jù)實際情況按1:2~1:5的比例進行。

              3)細胞凍存: 收到細胞后建議在培養(yǎng)前3代時凍存一批細胞種子以備后續(xù)實驗使用。

              AML12小鼠肝細胞.png

              下面T25瓶為例;

              1. 細胞凍存時按照細胞傳代的過程收集消化好的細胞到離心管中,可使用血球計數(shù)板計數(shù),來決定細胞的凍存密度。一般細胞的推薦凍存密度為1×106~1×107個活細胞/ml.

              2. 1000rpm離心3-5min,去掉上清。用配制好的細胞凍存液重懸細胞 ,按每1ml凍存液含1×106~1×107個活細胞/ml分配到一個凍存管中將細胞分配到凍存管中,標注好名稱、代數(shù)、日期等信息。

              3. 將要凍存的細胞置于程序降溫盒中,-80度冰箱中過夜,之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲存。同時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。

               

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