1. <i id="2adny"></i>

          <small id="2adny"><dl id="2adny"><small id="2adny"></small></dl></small>

            <i id="2adny"><ins id="2adny"></ins></i>

            1. 国产精品久久久久久久久久三级_日本一区二区在线视频_国产日韩视频在线_性色av乱码一区二区三区_来一水AV@lysav

              網(wǎng)站首頁技術(shù)中心 > HUVEC+GFP人臍靜脈內(nèi)皮細胞永生化+GFP傳代/復(fù)蘇技巧
              產(chǎn)品目錄
              HUVEC+GFP人臍靜脈內(nèi)皮細胞永生化+GFP傳代/復(fù)蘇技巧
              更新時間:2024-08-13 點擊量:254

              HUVEC+GFP人臍靜脈內(nèi)皮細胞永生化+GFP

              Immortalization of human umbilical vein endothelial cells ,HUVEC GFP

              貨號:YJ-0022a(免疫熒光鑒定)

              價格: 3200.0

              規(guī)格: 1*10 6

              細胞介紹

              該細胞來源于人靜脈內(nèi)皮,可在半固體培養(yǎng)基中形成克隆,在免疫抑制小鼠中不能形成腫瘤。

              該細胞通過慢病毒轉(zhuǎn)染的方式攜帶GFP基因。

              細胞特性

              1 來源:人臍帶組織

              2 形態(tài):內(nèi)皮細胞樣 貼壁生長

              3 含量:>1x106  細胞數(shù)

              4 規(guī)格:T25瓶或者1mL凍存管包裝

              5)  用途:僅供科研使用。

              細胞篩選

              該細胞為穩(wěn)定轉(zhuǎn)染GFP的細胞,隨細胞傳代次數(shù)的增加,其GFP熒光強度會逐漸減弱。若實驗要求需要維持熒光強度,可以加入嘌呤霉素進行再次篩選。

              建議收到細胞后至少傳3代,凍存留種后再進行篩選。

              初次進行細胞篩選時,建議加入終濃度為1ug/ml嘌呤霉素的完全培養(yǎng)基維持培養(yǎng),若無細胞漂浮或者漂浮較少,即可更換為含2ug/ml嘌呤霉素的完全培養(yǎng)基繼續(xù)篩選,以此類推,至最高藥物濃度為5ug/ml。若篩選過程中,漂浮細胞大于60%,則停止篩選,換成正常培養(yǎng)基培養(yǎng),至細胞密度約80%,可繼續(xù)加入同濃度嘌呤霉素進行篩選。當加入5ug/ml嘌呤霉素時細胞正常增殖,可停止篩選,用不含藥完全培養(yǎng)基正常培養(yǎng)。

              一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備

              準備內(nèi)皮細胞培養(yǎng)體系(推薦:PriMed-YJ-002      

              內(nèi)皮細胞培養(yǎng)基礎(chǔ)培養(yǎng)基                     93%

              胎牛血清(FBS                                 5%

              內(nèi)皮細胞培養(yǎng)添加劑                             1%

              青霉素/鏈霉素,P/S                               1%

              1 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%

              2 凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。

              二.細胞處理:

              1 凍存細胞的復(fù)蘇:

              將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入到含4-6mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,完全培養(yǎng)基重懸細胞。然后將細胞懸液加入含6-8ml完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶(或皿)中37℃培養(yǎng)過夜。第二天顯微鏡下觀察細胞生長情況和細胞密度。

              2 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。

              對于貼壁細胞傳代可以參考以下方法:

              1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

              2. 加入0.25%(w / v)胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中(T251-2mLT752-3mL),置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘(難消化的細胞可以適當延長消化時間),然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml10%FBS的培養(yǎng)基來終止消化。

              3.輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細胞懸液按12的比例分到新T25瓶中,添加6-8ml按照說明書要求配置的新的完全培養(yǎng)基以保持細胞的生長活力,后續(xù)傳代根據(jù)實際情況按1:2~1:5的比例進行。

              3)細胞凍存: 收到細胞后建議在培養(yǎng)前3代時凍存一批細胞種子以備后續(xù)實驗使用。

              HUVEC+GFP人臍靜脈內(nèi)皮細胞永生化+GFP傳代/復(fù)蘇技巧


              下面T25瓶為例;

              1. 細胞凍存時按照細胞傳代的過程收集消化好的細胞到離心管中,可使用血球計數(shù)板計數(shù),來決定細胞的凍存密度。一般細胞的推薦凍存密度為1×106~1×107個活細胞/ml.

              2. 1000rpm離心3-5min,去掉上清。用配制好的細胞凍存液重懸細胞 ,按每1ml凍存液含1×106~1×107個活細胞/ml分配到一個凍存管中將細胞分配到凍存管中,標注好名稱、代數(shù)、日期等信息。

              2011年開始我們致力于在生命科學領(lǐng)域生物醫(yī)學實驗技術(shù)及論文潤色服務(wù),協(xié)助客戶各類實驗服務(wù)及論文潤色十余年,是您值得信賴的科研合作伙伴!

              如果您受時間、試驗條件等限制而無法完成您的課題研究,歡迎您與我們聯(lián)系。

              實驗技術(shù)服務(wù):



              滬公網(wǎng)安備 31011802001677號

              国产精品久久久久久久久久三级_日本一区二区在线视频_国产日韩视频在线_性色av乱码一区二区三区_来一水AV@lysav
                  1. <i id="2adny"></i>

                      <small id="2adny"><dl id="2adny"><small id="2adny"></small></dl></small>

                        <i id="2adny"><ins id="2adny"></ins></i>

                        1. 汤阴县| 随州市| 民县| 花莲县| 温泉县| 巴彦县| 分宜县| 黄山市| 阳谷县| 屯留县| 靖州| 盐山县| 香格里拉县| 长阳| 贡嘎县| 儋州市| 吐鲁番市| 和政县| 台北市| 宁远县| 文山县| 黑龙江省| 宁国市| 蓬安县| 长沙县| 防城港市| 霍城县| 青龙| 萨嘎县| 库尔勒市| 惠来县| 延安市| 乌拉特中旗| 诏安县| 武强县| 布尔津县| 贵南县| 崇明县| 莒南县| 天台县| 全南县|