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              磁珠法PCR產物純化回收試劑盒說明書
              更新時間:2015-05-27 點擊量:3184

                 

              磁珠法PCR產物純化回收試劑盒說明書

               

               

              Magbind PCR Purification Kit

              目錄號:YJ2516

              運輸條件:室溫(15-25℃)。

              保存條件:MBPure 2-8℃保存,其他組分室溫(15-25℃)保存。

              組分說明

               

                                     Size          5 ml       60 ml

                                     MBPure        5 ml       60 ml

                                     Buffer PW    12 ml     3×48 ml

                                     Buffer EB     6 ml       60 ml

               

               

                            本產品僅供科研使用,請勿用于臨床診斷及其他用途

               

                             上海研謹生物中國生物試劑生產商  

               

               

              產品簡介

               

                本試劑盒提供了一種簡單、快速、的核酸純化方法。MBPure與樣品按一定比

              例混合后,磁珠選擇性的將核酸吸附。漂洗后,洗脫得到的DNA純度高,A260/A280                                   的比值在1.7-1.9之間,A260/A230的比值通常在2.0以上。經該試劑盒純化得到的  DNA適用于測序,克隆等下游實驗。

              試劑盒說明

               

                    Sample type         Typical yield     Sample type        Typical yield

                    5000 bp segment      Up to 90%      1000 bp segment       Up to 90%

                    500 bp segment       Up to 80%       200 bp segment       Up to 80%

               

              純化回收得率的計算

               

                 我們建議通過瓊脂糖電泳純化前后的樣品進行回收得率的計算。我們不建議通過

              260 nm處的光吸收值來計算回收得率。因為溶液中單鏈、雙鏈DNA和dNTP以及一些純

              化前的某些雜質在260 nm處都有光吸收,這樣在計算回收前樣品中 DNA濃度時會得到

              一個假的、虛高的DNA濃度值。

              實驗前準備及重要注意事項

              1.嚴禁冰凍、離心。冰凍、離心可能會對磁珠造成不可逆的損害。

              2.磁珠長期放置后會聚集成團,從而使磁珠表面積減小,降低樣品回收得率,使用前

                 一定要渦旋振蕩*混勻磁珠(這一過程通常需要渦旋振蕩20秒)。

              3.本試劑盒不適用于純化回收小于100 bp的DNA片段,如果要回收小于100 bp的DNA

                 片段,可將MBPure的用量增加到樣品體積的4倍。

              自備儀器

              1.恒溫混勻儀——建議使用Eppendorf設計生產的Thermomixer。

              2.磁力架——建議使用DynaMagTM-2(Cat. No. 12321D)。

               

              操作步驟(手動)

               

                 1.渦旋振蕩MBPure 20秒,使其*混勻為均一溶液。

                 2.向1.5 ml的離心管中加入待純化的PCR產物或其他DNA樣本,然后加入2倍樣品體積的MBPure。渦旋振蕩混勻后,室溫下在1400 rpm的Thermomixer上振蕩5分鐘。

               

              注意:如無Thermomixer,可將離心管連續(xù)顛倒混勻10分鐘。

                 3.將上一步的離心管放于磁力架上,直至磁珠*吸附(約需1分鐘)。

                 4.保持離心管固定于磁力架上,棄去溶液,期間避免接觸磁珠。

                 5.向上一步的離心管中加入500 μl Buffer PW后,將離心管從磁力架上取下,渦旋振蕩

                    10秒鐘后將離心管重新放回磁力架。靜置1分鐘,待磁珠*吸附于離心管側壁后*棄去漂洗液。

                 6.重復步驟5。

                 7.保持離心管固定于磁力架上靜置放置10分鐘,使乙醇*揮發(fā)干凈。

                    注意:如果磁珠干燥過度會極大的降低DNA的回收得率。

                 8.將離心管從磁力架上取下,加入20-100 μl Buffer EB,渦旋振蕩將磁珠重懸于洗脫液

                    中后將離心管放于65℃、1400 rpm的Thermomixer上振蕩洗脫5分鐘。

              注意:如無Thermomixer,可將離心管放于65℃水浴鍋或金屬浴中孵育。孵育期間每隔2分鐘渦旋震蕩5秒鐘。

                 9.將離心管放于磁力架上直至磁珠*吸附(約需1分鐘)。

                 10.將洗脫液轉移至一個新的1.5 ml離心管中。此時,可棄去磁珠。

               

              滬公網安備 31011802001677號

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