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              產(chǎn)品目錄
              DH5α感受態(tài)細(xì)胞說明書
              更新時(shí)間:2021-03-10 點(diǎn)擊量:2953

               

              DH5α感受態(tài)細(xì)胞說明書

                 DH5α Competent Cell

                 目錄號(hào):B0808

               

                 保存條件:-80℃保存。

               

                 組分說明

               

                                    Cat. No.                         B0808B

                                    Size                             10×100  μl

                                    DH5α  Competent  Cell            10×100  μl

                                    Control DNA pUC19,0.1    ng/μl      10 μl

               

                 產(chǎn)品簡介

               

                  本產(chǎn)品是采用大腸桿菌DH5α菌株經(jīng)特殊工藝處理得到的感受態(tài)細(xì)胞,可用于DNA

              的熱擊轉(zhuǎn)化。DH5α是一種常用于質(zhì)粒克隆的菌株,其φ80lacZΔM15基因產(chǎn)物可與載

              體編碼的β-半乳糖苷酶氨基端實(shí)現(xiàn)α互補(bǔ),可用于藍(lán)白斑篩選 recA1和endA1的突變

              有利于克隆DNA的穩(wěn)定和高純度質(zhì)粒DNA的提取。使用pUC19質(zhì)粒檢測,轉(zhuǎn)化效率可

              達(dá)108,適用于的質(zhì)粒DNA克隆并能保證高拷貝質(zhì)粒的穩(wěn)定復(fù)制。

              本產(chǎn)品僅供科研使用,請勿用于臨床診斷及其他用途

              注意事項(xiàng)

               

               1.感受態(tài)細(xì)胞一定要用干冰運(yùn)輸。感受態(tài)細(xì)胞應(yīng)在 -80℃下保存,不可反復(fù)凍融和放

                  置時(shí)間過長,以免降低感受態(tài)細(xì)胞的轉(zhuǎn)化效率。

                  2.轉(zhuǎn)化所有步驟均在無菌條件下操作。

                  3.包裝中有0.1ng/μl的pUC19DNA,供對照試驗(yàn)使用。

               

                  操作步驟

               

               1.取感受態(tài)細(xì)胞置于冰浴中。一次轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞的建議用量為50-100μl,可以根據(jù)實(shí)際情況分裝使用。

              以下實(shí)驗(yàn)以50μl感受態(tài)細(xì)胞為例。

               2.待感受態(tài)細(xì)胞融化后,向感受態(tài)細(xì)胞懸液中加入目的DNA(根據(jù)實(shí)際情況加入適量

                  的DNA,通常100μl感受態(tài)細(xì)胞能夠被1ng超螺旋質(zhì)粒DNA所飽和),用移液器輕輕吹打混勻,冰浴30分鐘。

               3.42℃熱擊45秒,迅速將離心管轉(zhuǎn)移到冰浴中,冰上靜置2-3分鐘。

               4.每個(gè)離心管中加入450μl無菌的SOC或LB培養(yǎng)基(不含抗生素),混勻后置于37℃搖床,150rpm振蕩培養(yǎng)45分鐘使菌體復(fù)蘇。

               5.根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求,取適量已轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細(xì)胞,加到含相應(yīng)抗生素的SOC或LB固體瓊脂培養(yǎng)基上,用無菌的涂布棒將細(xì)胞均勻涂開,將平板置于37℃直至液體被吸收,倒置培養(yǎng),37℃培養(yǎng)12-16小時(shí)。

               

               注意:1)涂布用量可根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)調(diào)整。若轉(zhuǎn)化的DNA總量較多,可取少量轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂布平板;若轉(zhuǎn)化的DNA總量較少,可取200-300μl轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂布平板。若預(yù)計(jì)的克隆數(shù)較少,可通過離心(4,000rpm,2分鐘)后吸除部分培養(yǎng)液,懸浮菌體后將其涂布于平板中。

                 2)新制備的固體培養(yǎng)基不易涂干,可將平板正置于37℃直至液體被吸收后再倒置培養(yǎng)。

                 3)涂布剩余的菌液可置于4℃保存,如果次日的轉(zhuǎn)化菌落數(shù)過少,可以將剩下的菌液再涂布新培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。

               

              實(shí)驗(yàn)代做服務(wù):

              ELISA試劑盒免費(fèi)代檢測

              CCK8檢測

              HE染色

              蛋白相互作用分析

              Western Blot

              免疫組化IHC染色

              熒光定量PCR

              動(dòng)物模型服務(wù)

              流式細(xì)胞檢測

              免疫熒光染色

              激光共聚焦

              DNA甲基化實(shí)驗(yàn)

              石蠟/冰凍切片

              透射電鏡服務(wù)

              掃描電鏡實(shí)驗(yàn)

              蛋白雙向(2-D)

              動(dòng)物實(shí)驗(yàn)

              免疫共沉淀

              原位雜交(FIsh

              蛋白質(zhì)純化

              分子克隆和質(zhì)粒載體構(gòu)建服務(wù)

              組蛋白甲基化磷酸化乙酰化

               

              蛋白雙向2D-WB

               

              藥理毒理動(dòng)物實(shí)驗(yàn)

               

              番紅O固綠染色

              明膠酶譜MMP

              酶活性檢測

              動(dòng)物造模/模型實(shí)驗(yàn)服務(wù)

               

              滬公網(wǎng)安備 31011802001677號(hào)

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