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              網(wǎng)站首頁(yè)產(chǎn)品展示酶聯(lián)免疫ELISA試劑盒其它ELISA > 96孔克倫特羅檢測(cè)試劑盒
              克倫特羅檢測(cè)試劑盒

              克倫特羅檢測(cè)試劑盒

              產(chǎn)品型號(hào): 96孔

              所屬分類:其它ELISA

              產(chǎn)品時(shí)間:2024-08-30

              簡(jiǎn)要描述:克倫特羅快速測(cè)試劑盒可檢樣本:豬肉、豬肝、血清、飼料、豬尿 克倫特羅檢測(cè)試劑盒

              詳細(xì)說明:

              克倫特羅快速檢測(cè)試劑盒說明書

               

              、原理

               

              本試劑盒采用間接競(jìng)爭(zhēng) ELISA 方法,在微孔條上預(yù)包被偶聯(lián)抗原,樣本中的殘留物克倫特羅將和微孔條上預(yù)包被的偶聯(lián)抗原競(jìng)爭(zhēng)抗克倫特羅抗體,加入酶標(biāo)記物后,用 TMB 底物顯色,樣本吸光值與其所含殘留物克倫特羅的含量成負(fù)相關(guān),與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較即可得出相應(yīng)殘留物克倫特羅的含量。

               

              二、試劑盒特性

              試劑盒靈敏度:  0.1ppb

              孵育溫度: 25℃

              孵育時(shí)間: 30min~15min

              樣本檢測(cè)下限

              尿 樣                                 0.1ppb

              組 織(處理法一)                    0.4ppb

              組 織(處理法二)                     0.1ppb

              飼 料                                 1ppb

              交叉反應(yīng)率

              克倫特羅(Clenbuterol)                100%

              pu他林(Terbutalin)                  <1%

              馬布特羅(Mabuterol)                    <1%

              溴布特羅(Brombuterol)                  <1%

              沙丁胺醇(Salbutamol )               <1%

              萊克多巴胺(Ractopamine)            <1%

              樣本回收率

              尿 樣                 95%±22%

              組 織                 75%±20%

              飼 料                 80%±20%

              三、試劑盒組成  

                1 微量測(cè)試孔 每條 8 孔,一板 12 條

                   標(biāo)準(zhǔn)液×6 瓶 0ppb 0.1ppb

              2  0.3ppb 0.9ppb

               (1ml/瓶)  

                2.7ppb 8.1ppb

              3 酶標(biāo)記物 7ml 紅色帽

              4 抗體工作液 10ml 藍(lán)色帽

              5 底物 A 液 7ml 白色帽

              6 底物 B 液 7ml 黑色帽

              7 終止液 7ml 黃色帽

              四、所用儀器、試劑

              具備的儀器:酶標(biāo)儀、均質(zhì)器、振蕩器、離心機(jī)、刻度移液管、天平(感量 0.01g)、氮吹儀、恒溫箱、打印機(jī)

               

              微量移液器:?jiǎn)蔚?20~200µl、單道 100~1000µl、多道 30~300 µl

              試 劑:乙酸乙酯、乙腈、氫氧化鈉、濃鹽酸、

              甲醇、無(wú)水硫酸鈉、正己烷

              五、樣本前處理步驟

              樣本處理前須知

              (a)實(shí)驗(yàn)中必須使用一次性吸頭,吸取不同試劑時(shí)要更換吸頭。

              (b)實(shí)驗(yàn)之前須檢查各種實(shí)驗(yàn)器具是否干凈,必要時(shí)可對(duì)實(shí)驗(yàn)器具進(jìn)行清潔,以避免污染干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

              u 樣本前處理需配制:

              配液 1  0.1M HCl 溶液取 0.86ml 濃 HCl 加水定溶至 100ml。

              配液 2  0.1M NaOH 溶液稱取 0.4g NaOH 加水定溶至 100ml。

              配液 3  乙腈-0.1M HCl 溶液V 乙腈:VHCl =84:16。

              樣本處理:

              (a)尿樣本的處理方法

              取 20µl 清亮尿樣直接測(cè)定(如果尿樣渾濁一定要過濾或 4000r/min 離心 10min,直至得到清亮尿樣),暫不使用的樣本應(yīng)冷凍保存。 3、 在 ELISA 分析中的再現(xiàn)性,很大程度上取決于樣本稀釋倍數(shù):  1 倍 洗板的*性,正確的洗板操作是 ELISA 測(cè)定

              (b)組織樣本的處理方法一 程序中的要點(diǎn)。

              1、稱 2±0.05g 均質(zhì)后的組織至 50ml 離心管中,加 4、 所有恒溫孵育過程,避免光線照射,用蓋板膜入 6ml 去離子水,充分振蕩 2min,室溫 蓋住微孔板。

              4000r/min 以上離心 10min(注:若組織樣本中油 u  操作步驟:

              脂含量較高,可在振蕩后放入 85℃水浴 10min 1、從 2~8℃冷藏環(huán)境中取出所需試劑,室溫(20~后再離心); 25℃)平衡 30min 以上,注意每種液體試劑使

              2、取 20µl 上層液進(jìn)行分析。 用前均須搖勻。

              樣本稀釋倍數(shù):  4 倍 2、取出框架及需要數(shù)量的微孔,將不用的微孔放

              (c)組織樣本的處理方法二 入自封袋,保存于 2~8℃。

              1、稱取 2 ± 0.05g 均質(zhì)后的組織于 50ml 離心管 3、編號(hào):將樣本和標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào),每中,加入 6ml 乙腈-0.1MHCl,振蕩 2min,室溫 個(gè)樣本和標(biāo)準(zhǔn)品做 2 孔平行,并記錄標(biāo)準(zhǔn)孔和

              4000r/min 以上離心 10min; 樣本孔所在的位置。

              2、取上清 3ml,加入 2ml 0.1M NaOH,加入 6ml 4、加標(biāo)準(zhǔn)品/樣本 20µl/孔到各自的微孔中,然后加乙酸乙酯,振蕩 1min,室溫 4000r/min 以上離 酶標(biāo)記物 50µl/孔,再加入 80µl/孔的抗體工作心 10min。取全部上清于 50~60℃氮?dú)饬骰蚩?液,用蓋板膜蓋板,輕輕振蕩混勻,25℃環(huán)境氣流吹干; 反應(yīng) 30min。

              3、加入 1ml 去離子水溶解干燥后的殘留物,混合 5、將孔內(nèi)液體甩干,用去離子水 250µl/孔洗板 4~30s; 5 次,每次間隔 15~30 秒,用吸水紙拍干(拍

              4、取 20 µl 用于分析。 干后未清除的氣泡可用干凈的槍頭刺破)。

              樣本稀釋倍數(shù): 1 倍 6、顯色:加入底物 A 液 50µl/孔,再加入底物 B

              (d)飼料處理方法 液 50µl/孔,輕輕振蕩混勻,25℃環(huán)境中避光顯

              1、稱1.0±0.05g 研碎的飼料樣品于50ml 離心管中, 色 15min。

              加入 10ml 甲醇,再加入 5g 無(wú)水硫酸鈉,充分 7、測(cè)定:加入終止液 50µl/孔,輕輕振蕩混勻,設(shè)振蕩 2min;15℃ 4000r/min 以上離心 10min; 定酶標(biāo)儀于 450nm 處(建議用雙波長(zhǎng) 450/630n

              2、吸出離心后的上清液 1ml,于 50~60℃氮?dú)饬?m 檢測(cè),5min 內(nèi)讀數(shù)),測(cè)定每孔 OD 值。或空氣流吹干,用 1 ml 去離子水溶解干燥后的 七、結(jié)果判定殘留物,再加入 1ml 正己烷混合 30s ;15℃ 結(jié)果判定有兩種方法,粗略判定可用第 1 種方4000r/min 以上離心 5min;去除上層有機(jī)相;

               法,定量判定用第 2 種方法。注意樣本吸光度值與

              3、取下層 20 µl 用于分析。

               其所含克倫特羅量成負(fù)相關(guān)。

               樣本稀釋倍數(shù):10 1、粗略判定:

               六、酶標(biāo)免疫分析程序: 用樣本的平均吸光度值與標(biāo)準(zhǔn)值比較即可得出

              u   測(cè)定前應(yīng)須知: 其濃度范圍(ng/ml)。假設(shè)樣本 1 的吸光度值為 0.3,

              1、 使用前將需用試劑和板條的溫度回升至室溫 樣本 2 的吸光度值為 1.0,標(biāo)準(zhǔn)液吸光度值分別是:(20~25℃)。 0ppb 為 2.243; 0.1ppb 為 1.816;0.3ppb 為 1.415;

              2、 使用之后立即將所有試劑放回 2~8℃。 0.9ppb 為 0.74;2.7ppb 為 0.313;8.1ppb 為 0.155。則樣本 1 的濃度范圍是 2.7ppb~8.1ppb;樣本 2 的濃度范圍是 0.3ppb~0.9ppb,乘以其對(duì)應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中克倫特羅實(shí)際濃度。

               

              2、定量分析

               

              1. 百分吸光率的計(jì)算,標(biāo)準(zhǔn)品或樣本的百分吸光率等于標(biāo)準(zhǔn)品或樣本的吸光度值的平均值(雙孔)除以*個(gè)標(biāo)準(zhǔn)(0 標(biāo)準(zhǔn))的吸光度值,再乘以 100%,即B百分吸光率(%)= ×100?
              2. B—標(biāo)準(zhǔn)溶液或樣本溶液的平均吸光度值 B0—0ng/ml 標(biāo)準(zhǔn)溶液的平均吸光度值

              (2)標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制與計(jì)算以標(biāo)準(zhǔn)品百分吸光率為縱坐標(biāo),以克倫特羅標(biāo)

              準(zhǔn)品濃度(ng/ml)的半對(duì)數(shù)為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標(biāo)準(zhǔn)曲線中,從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出樣本所對(duì)應(yīng)的濃度,乘以其對(duì)應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中克倫特羅實(shí)際濃度。

              若利用試劑盒專業(yè)分析軟件進(jìn)行計(jì)算,更便于大量樣本的準(zhǔn)確、快速分析。

              八、注意事項(xiàng):

              1、室溫低于 25℃或試劑及標(biāo)本未回到室溫(20~25℃)會(huì)導(dǎo)致所有標(biāo)準(zhǔn)的 OD 值偏低。

              2、在洗板過程中如果出現(xiàn)板孔干燥的情況,則會(huì)伴隨著標(biāo)準(zhǔn)曲線不成線性,重復(fù)性不好的現(xiàn)象。所以洗板拍干后應(yīng)立即進(jìn)行下一步操作。

              3、混合要均勻,否則會(huì)出現(xiàn)重復(fù)性不好的現(xiàn)象。

              4、反應(yīng)終止液為 2M 硫酸,避免接觸皮膚。

              5、不要使用過了有效日期的試劑盒;稀釋或攙雜使用會(huì)引起靈敏度、OD 值變化;不要交換使用不同批號(hào)的盒中試劑。

               

              6、不用的微孔板放進(jìn)自封袋重新密封;標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和無(wú)色的發(fā)色劑對(duì)光敏感,因此要避免直接暴露在光線下。

              7、顯色液若有任何顏色表明變質(zhì),應(yīng)當(dāng)棄之。標(biāo)準(zhǔn)品 1 的吸光度值小于 0.5 時(shí),表示試劑可能變質(zhì)。

              8、該試劑盒jia反應(yīng)溫度為 25℃,溫度過高或過低將導(dǎo)致檢測(cè)吸光度值和靈敏度發(fā)生變化。

              九、儲(chǔ)藏條件和保質(zhì)期

              1、儲(chǔ)藏條件:試劑盒于 2-8℃保存,不要冷凍。

              2、保 質(zhì) 期:該產(chǎn)品有效期為 1 年,生產(chǎn)日期見包裝盒。

              提示:酶標(biāo)板真空包裝袋若有漏氣,酶標(biāo)板仍然正常有效,不影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果,請(qǐng)放心使用。

               

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