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              石蠟/冰凍切片TUNEL凋亡

              石蠟/冰凍切片TUNEL凋亡

              產(chǎn)品型號:

              所屬分類:病理學檢測實驗

              產(chǎn)品時間:2024-08-30

              簡要描述:石蠟/冰凍切片TUNEL凋亡
              客戶提供固定組織
              1.實驗周期: 1-2周
              2.交付標準:蠟塊、切片、染色圖片.實驗報告(實驗步驟、試劑、耗材等)

              詳細說明:

              服務名稱:石蠟/冰凍切片TUNEL凋亡

              提供商:上海研研謹生物

              規(guī)格:石蠟/冰凍切片TUNEL凋亡


              TUNEL凋亡顯色法

              TUNEL (TdT-mediated dUTP Nick-End Labeling)法檢測細胞凋亡的原理是當細胞發(fā)生凋亡時,DNA內(nèi)切酶被激活,核小體間的基因組DNA被切斷,暴露的3'-OH可以在末端脫氧核苷酸轉移酶(Terminal Deoxynucleotidyl Transferase, TdT)

              加上帶有生物素(Biotin) 標記的dUTP即Bitin-dUTP.,隨后于辣根過氧化物酶 (HRP) 標記的streptavidin結合, 在HRP的催化下通過DAB顯色來顯示凋亡細胞,從而可以通過普通光學顯微鏡檢測到細胞凋亡。


              實驗意義

              1. TUNEL法是一種分子生物學 與形態(tài)學相結合的研究方法,可對完整的單個凋亡細胞或者凋亡小體進行原位染色,可以準確反映細胞凋亡典型的生物化學和形態(tài)特征。

              2.可用于石蠟切片冰凍切片培養(yǎng)的細胞等進行細胞凋亡檢測,靈敏度遠比一般的組織化學和生物化學方法要高。

              3.操作簡便快捷,在細胞凋亡的研究中被廣泛采用。


              實驗步驟


              1.石蠟切片TUNEL顯色法:

              ①石蠟切片常規(guī)脫蠟至水,脫蠟劑二甲苯,至水劑乙醇;

              ②PBS漂洗3*5 min; .

              ③加入蛋白酶K工作液37°C反應15-30 min, PBS漂洗3x5 min;

              ④4%多聚甲醛(pH7 .4的PBS)室溫固定15-30 min, PBS漂洗3x5 min;

              ⑤浸入封閉液(3%H202)室溫封閉10 min, PBS漂洗3x5 min;

              ⑥加入適量TdT酶反應液,暗濕盒中37°C反應1 h,用SSC室溫15 min終止反應后,PBS漂洗3x5 min; .

              ⑦浸入0.3% H202封閉內(nèi)源性過氧化物酶活性,室溫孵育3-5 min, PBS漂洗3x5 min;

              ⑧滴加Streptavidin-HRP工作液,37*C反應30-60 min, PBS漂洗3x5 min;

              ⑨滴加DAB顯色液后用去離子水漂洗數(shù)次;

              10選擇是否用DAPI復染細胞核;

              脫水、透明、中性樹膠封片后進行觀察。


              2.冰凍切片TUNEL顯色法:

              ①新鮮組織經(jīng)處理后,立即在恒冷冰凍切片機內(nèi)切片,厚度為5~6 um;

              ②防脫玻片,貼片,室溫陰干約12 h;

              ③4%多聚甲醛(pH7 4的PBS)室溫固定10 min, PBS漂洗3x5 min;

              ④浸入封閉液(3%H202)室溫封閉10 min, PBS漂洗3x5 min;

              ⑤浸入邇透液(0.1% Triton X-100溶于PBS中),室溫通透30 S-2 min;

              ⑥加入適量TdT酶反應液,暗濕盒中37°C反應1 h,用SSC室溫15 min終止反應后,PBS漂洗3x5 min; .

              ⑦浸入0.3% H2O2封閉內(nèi)源性過氧化物酶活性,室溫孵育3-5 min, PBS漂洗3x5 min;

              ⑧滴加Streptavidin-HRP工作液,379C反應30-60 min, PBS漂洗3x5 min;

              ⑨滴加DAB顯色液后用去離子水漂洗數(shù)次:

              @選擇是否用DAPI復染細胞核;

              脫水、透明、中性樹膠封片后進行觀察。

              實驗完成周期及交付標準

              1.實驗周期: 1-2周

              2.交付標準:蠟塊、切片、染色圖片.實驗報告(實驗步驟、試劑、耗材等)


              需確認的信息

              1.樣本的種屬.

              2.樣本的類型(固定的組織or蠟塊or切片)

              3.是否提供試劑盒

              4.拍照要求


              收費標準服務周期提供結果:

              歡迎咨詢詳談,我們會根據(jù)您的方案及需求制定詳細的服務協(xié)議。

              更多實驗技術服務請瀏覽網(wǎng)站其他內(nèi)容,或來電詢!


              實驗代做服務:

              ELISA試劑盒免費代檢測

              CCK8檢測

              基因組DNA提取


              蛋白相互作用分析

              Western Blot

              免疫組化

              熒光定量PCR

              動物模型服務

              流式細胞檢測

              ROS氧化分析

              激光共聚焦

              DNA甲基化實驗

              細胞劃痕

              鈣離子濃度檢測

              掃描電鏡實驗

              microRNA測序

              動物實驗

              探針合成

              ATP/ADP檢測

              石蠟/冰凍切片

              定點突變

              線粒體膜電位(MMP)檢測

              細胞生長曲線的測定

              藥理毒理動物實驗


              免疫共沉淀

              真核表達載體構建

              染色質免疫沉淀CHIP

              非標定量(Label-free)實驗




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